中科院田勇研究组Sci Rep发表CRISPR新成果-商家动态-资讯-生物在线

中科院田勇研究组Sci Rep发表CRISPR新成果

作者:上海源叶生物科技有限公司 2014-09-25T11:20 (访问量:2745)

动物模型对于基因功能研究起到了很大的帮助。近年来,一些新基因组编辑技术(CRISPR/Cas9、TALEN或ZFN)被用于建立动物和人类细胞模型,尤其是能进行多重基因组修饰的CRISPR/Cas9技术。CRISPR/Cas9能够快速生成多品系的实验动物,人们已经利用这一技术生成了多种动物模型,包括小鼠、大鼠、斑马鱼、兔、猪、猴。
在基因组编辑技术的推动下,建立动物和细胞模型的速度也越来越快。在这种情况下,基因分型过程成为了新的瓶颈,尤其是在进行高通量筛选时。目前,检测靶位点插入突变的技术主要有Surveyor分析、T7E1分析(T7 endonuclease 1)和HRMA(High Resolution Melt Analysis)。人们在用CRISPR/Cas9建立小鼠和大鼠模型时,主要用的是T7E1分析。
对于高通量筛选而言T7E1分析法既费时又费力,因此亟需一个简单有效的基因分型策略。中科院生物物理所的田勇研究员带领研究团队,开发了一种PAGE基因分型法。这一成果于九月十九日发表在Nature旗下的Scientific Reports杂志上,文章的通讯作者是中科院生物物理所的田勇研究员和Shengdi Hu。
研究人员通过CRISPR/Cas9系统建立了6个品系的小鼠(包括单个和多重基因组编辑小鼠),并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法对F0至F2代的小鼠进行了基因分型。研究显示,PAGE基因分型法检测mosaic DNA的灵敏度可达0.5%。此外,研究人员还用PAGE法在人293T和iPSC中,检测了CRISPR/Cas9的脱靶情况。(延伸阅读:Science:可编程的DNA剪刀)
研究表明,PAGE分析法比T7E1更简捷高效,符合人们日益增长的需求。这种方法有望替代T7E1成为基因分析的常规方案。

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