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如何多快好省地做Western blot?

作者:北京冬歌博业生物科技有限公司 2016-05-07T08:50 (访问量:2996)

Western blot虽然是检测蛋白质的最经典方法,但每个经历过的人都会吐槽,耗时太长了。每个实验大约要花费两天的时间,结果好,那自然神清气爽。可是,遇到白片呢?好心塞,实验又得优化。不知不觉,半个月过去了,seminar仍然没什么可汇报的。


缩短Western blot的时间,这不仅仅是你的希望,也是各大厂家的追求。为此,他们争相推出新产品,让Western blot快一点,再快一点。如今,转印的时间已经从过去的几小时缩短到现在的几分钟。至于转印前的跑胶,只要你舍得买预制胶,那也是个把小时内搞定的事情。只是后面的流程,虽说不需要太多的技巧,但也要按部就班,来来回回跑上好几次。这还让不让人好好看文献了。

正因为不需要太多的技巧,我们完全可以将这些步骤放手,交给自动化的仪器。市场上已经有一些这样的仪器,只需要你加入一抗、二抗、封闭液等试剂,它就能自动完成所有孵育和洗涤的工作。Life Technologies(赛默飞世尔旗下)的iBind蛋白印迹处理系统便是一种。

iBind系统上市两年来,得到了众多的好评。贝勒医学院的博士后Samuel Adeosun在尝试这台仪器之后,对干净的背景感到惊讶不已。“与我之前的手动操作相比,背景更低。令人惊奇的是,它居然不用电,也不需要真空抽吸,就能工作,”他说。总的来说,他认为iBind出色地完成了抗体杂交的过程。
不过,Adeosun也表示了一些遗憾,那就是它每次只能处理一块mini凝胶。也许Life Tech正是听到了这样的心声,才推出了新版的iBind Flex蛋白印迹处理系统。与之前的产品相比,iBind Flex更加灵活,可兼容不同的印迹膜规格和样品通量。

与第一代的iBind系统相比,iBind Flex更加灵活,能兼容不同规格的印迹膜,而样品通量也得到提高。它能够处理一块midi的印迹膜、或两块mini的印迹膜,或六条垂直剪切膜条(每条三个泳道)。这样,即使是在同一次运行中,也可以使用不同的一抗和二抗,便于你平行开展多个实验。当然,midi膜可不行哦,因为一整块是统一处理的。注意,如果是把膜剪下来,要顺着泳道垂直剪,而不是水平剪。

我们只要加入一抗、二抗等溶液即可离开,系统自动完成封闭、一抗和二抗孵育及所有洗涤步骤。整个过程可在3小时内完成,而你所花的,只是15-30分钟的准备时间。安心地去听讲座,或看文献,到时候回来就行了。怕忘了时间?没关系,iBind Flex的盖子上有一块区域,允许你记录孵育开始的时间,相当贴心。

当然,如果只是减少工作量,或许还不能打动老板,我们还需要一些漂亮的数据。对于多个单克隆和多克隆抗体而言,iBind Flex系统都带来了更高的灵敏度,以及Adeosun所说的,更低的背景。此外,自动化操作也减少了实验之间的可变性。通常,手动处理的变异系数(CV)大约在13%。而使用iBind Flex之后,CV可降至5% 以下。

你也许会担心抗体的用量会不会增加,特别是一抗。其实,用了iBind Flex,抗体反而节省了不少。对于我们常用的mini凝胶而言,iBind插槽只需要2 mL抗体溶液,按照1:1000的稀释比例反推,大约需要2 µL抗体,而培养皿大约需要5-10 mL。这样算来,抗体至少能节省一半以上。不过,抗体是不能够回收重用的。

怎么样?心动了吧。目前,Life Tech提供方便的iBind Flex起始套装,内含一台iBind Flex Western设备、一盒iBind Flex 卡片(10张)和一个iBind Flex溶液试剂盒,让您能立即开始操作。这种溶液适合HRP或AP标记的二抗。如果是荧光标记的二抗,建议使用另外一种荧光检测(FD)的溶液试剂盒。不过,卡片和溶液都是耗材,之后还需购买。
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