细胞房消毒方案-让您的细胞高枕无忧-技术前沿-资讯-生物在线

细胞房消毒方案-让您的细胞高枕无忧

作者:上海逍鹏生物科技有限公司 2021-07-28T10:14 (访问量:11338)

细胞形态异常主要原因有哪些?我们应该从哪些方面出发考虑,逍鹏生物以鱼骨模型为大家列举了六大考虑因素,今天我们将带领大家分析人为操作/环境因素。(点击此查看鱼骨图
人为操作和环境我们大致可以从以下几点进行考察分析:
操作人员、细胞房、生物安全柜、显微镜置物台、二氧化碳培养箱、水浴锅、震动、灭菌锅。
人源污染及预防



从人身上掉落的颗粒达到104/分钟(颗粒直径0.5μm)

人类1小时会脱落3*104-4*104个细胞;1年大概会脱落3.6kg的死细胞。

人类的皮肤总面积约2m2,存在约1012个微生物;我们1g的排遗物中约有1012个微生物。

-摘自上海高中生物第四册第一章微生物

人源污染

那么我们如何避免这些呢?接下来继续探讨~

1. 细胞房着装要求

操作细胞培养物前后应洗手,穿戴个人防护设备不仅可保护您免受危险品污染,还可降低皮屑以及衣服上污物和灰尘污染培养物的可能。

正确的穿衣顺序:
  • ① 换专用鞋
  • ② 无尘手套(避免不洁的双手经穿着时沾附于无尘衣上)
  • ③ 网帽(带网帽时须确保头发不可暴露于网帽外,之后戴口罩遮住口鼻)
  • ④ 无尘服(不要穿棉质衣服(脱落纤维))
  • ⑤ 鞋套

德克龙(聚酯)

2. 超净台试剂布局

超净工作台或安全柜里的物品摆放一般遵循以下右手使用习惯,并可根据特殊实验中增加物品进行相应的改动。

① 在工作台中部开阔区域放置细胞培养容器;
② 移液器置于右前方易于取用的地方;
③ 试剂和培养基置于右后方,便于吸取;
④ 试管架置于中后部,用于固定其他试剂;
⑤ 小型容器置于左后部,用于盛放废液。

适合惯用右手的工作人员的工作台基本布局。惯用左手的工作人员可相应地调整工作台面上物品的摆放位置。


3. 人为操作技巧
    • 小心取用无菌实验物品,勿碰触吸管尖头部或容器瓶口,也不要在打开的容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45°角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
    • 每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同也不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以75%酒精擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。
    • 离心管、冻存管等容器需用抗酒精的标记笔标示内容物名称、操作日期、操作人员姓名。若是细胞传代培养,更需注明目前的代数,以及这是同一代中的第几盘。


细胞房布局技巧

1. 细胞房功能分区

理想的无菌操作室应划分为三部分:

a) 更衣室---放在外,主要提供更换衣帽,鞋子,口罩,手套等。

b)缓冲室---位于更衣间与操作间之间,也可同时和几个操作间相通。目的是保证操作间的无菌环境,同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。

c)操作室---放在内间,分为无菌操作室、培养室、准备室、清洗室、消毒灭菌室、储存室。

房间设置要求:各个房间高度适宜(不超过2.5m),顶部过高会影响紫外线的灭菌效果;大小适当,房间过大,清扫和消毒不便;过小,操作不便;墙壁应光滑无死角,以便清洗和消毒。

2. 细胞房设计原则及条件

设计原则:防止微生物污染和有害因素影响。

条件要求:封闭、正压:隔离门和空调系统

温湿度:培养箱内是37℃,饱和湿度;室内是温度18℃-26℃,湿度是45%-65%。

洁净度:空气洁净度等级是洁净空间单位体积空气中,以大于或等于被考虑粒径的离子最大浓度限值进行划分的等级标准。洁净度等级应在空态、静态和动态放大进行测试,使用尘埃粒子测试仪来测定。

3. 细胞房布局原则

摘自:《Culture of Animal Cells》

细胞房维护保养:

1. 每天检查并记录细胞房温度、相对湿度(细胞房温湿度记录表),发现异常要及时报告并处理。

2. 生物安全柜或超净台维护:每年委托有资质第三方对生物安全柜或超净台进行风速、气流流型、高效测漏、尘埃粒子、沉降菌的检测。

日常维护:定期对生物安全柜或超净台进行尘埃粒子、沉降菌或浮游菌的测试,发现不合格及时更换滤网或进行维修。

3. 空调系统维护: 定时更换初中效过滤器,每年请有资质第三方对洁净室进行尘埃粒子、沉降菌或浮游菌、换气次数、高效测漏、压差等检测。

日常维护:按照要求定期监测尘埃粒子、沉降菌或浮游菌。

细胞房消毒方法

1. 细胞培养箱防菌试剂

Pharmacidal IC-110100

主要成分:Pharmacidal 是由筛选过的有机氮化合物组成,主要组成成分为:苄基二甲基辛基氯化铵、苄索氯铵、三羟乙基胺,并添加丙二醇等清洁消毒剂。

作用原理:Pharmacidal作用方式是使脂质变性,分解细胞膜的双层磷脂质和增加细胞通透性,导致酶的灭活,蛋白质沉淀,与DNA和RNA产生反应。

特点: Pharmacidal 对大部分的细菌、芽孢、支原体、真菌(酵母菌、霉菌)和病毒都有效。

使用方法:
  1. 可消毒橡胶手套、超净台面、桌面、显微镜台、试剂瓶身等物体表面,喷涂完全湿润,不需擦拭,自然风干

  2. 培养箱内壁喷涂完全湿润后,等待10分钟后,用无菌吸水纸吸干内壁上的残留液体。

2. 水浴锅、水盘防菌试剂

Aquaguard-1 Aquaguard-2

货号:01-867-1B 货号:01-916-1B

主要成分:苯甲酸钠 主要成分:2-溴代-2-**-1,3-丙二醇

Aquaguard-1

用来消毒培养箱中的水盘,可有效杀灭细菌、芽孢、支原体、真菌(酵母菌、霉菌)和病毒;无毒;对不锈钢无腐蚀性;不挥发。

用法:

1. 建议每两周进行一次系统的清洁和消毒培养箱。

2. 稀释100倍即可使用,即将1L水中加入10ml的Aquaguard-1溶液。


Aquaguard-2

用来消毒水浴锅,可有效杀灭细菌、芽孢、支原体、真菌(酵母菌、霉菌)和病毒。


用法:

1. 建议每周进行一次系统的清洁和消毒水浴锅。

2. 稀释500倍即可使用,即将1L水中加入2ml的Aquaguard-2溶液。

3. 超净台、桌面、试剂瓶身消毒方案

灭菌方法

作用原理

优点

缺点

Pharmacidal 喷壶

季铵盐作用方式是使脂质变性。分解细胞膜的双层磷脂和增加细胞通透性,导致酶失活,蛋白沉淀,与DNA和RNA产生反应,可有效防止真菌、细菌(和芽孢)和包膜病毒(包括HIV等RNA病毒)的污染和生长。

灭菌彻底;无毒无

害;无刺激性;无

腐蚀性;可生物降

不能与肥皂或其他阴离子洗涤剂同用,也不能与碘或过氧化物(如过氧化氢、磺胺粉等)同用,否则会抵消其作用。

酒精

乙醇的抗菌原理是使蛋白质变性

高效灭菌;价格

实惠

易挥发,作用时间短;有刺激性;易燃

新洁尔灭

(苯扎溴铵)

季铵盐类消毒剂属于阳离子表面活性剂,能吸附带阴离子的细菌并破坏细菌的细胞膜,增加细菌胞浆膜通透性, 使菌体胞浆物质外渗,阻碍其代谢而起到杀灭作用。

可杀灭常见细菌、

真菌;刺激性低;

无腐蚀

不能与肥皂或其他阴离子洗涤剂同用,也不能与碘或过氧化物(如过氧化氢、磺胺粉等)同用,否则会抵消其作用。

来苏尔

酚类可裂解并穿透细胞壁,使菌体蛋白凝集沉淀,快速杀

灭细胞。

可杀灭常见细菌、

真菌

刺激性强,易使橡胶制品变脆变硬

滴露

酚类可裂解并穿透细胞壁,使菌体蛋白凝集沉淀,快速杀

灭细胞。

可杀灭常见细菌、

真菌

刺激性强,易使橡胶制品变脆变硬

4. 细胞房空气消毒方案

灭菌方法

作用原理

优点

缺点

紫外线灯杀菌

波长在220-300nm的紫外线称为“杀生命区”,其中以260nm的杀菌力最强。紫外线作用于细胞DNA,使DNA链上相邻的嘧啶形成嘧啶二聚体(如胸腺嘧啶二聚体),抑制了DNA复制。

能有效杀灭常见的微生

物如金黄色葡萄球菌、

大肠杆菌

穿透力差;有死角;与被照物的距离以不超过1.2m为宜;致癌

甲醛

熏蒸

它能与蛋白质中的氨基酸结合而使蛋白变性,使酶的活性消失。

灭菌彻底;不易燃、

不爆炸,不腐蚀金属

残留性大;致癌

过氧化氢

干雾灭菌

通过复杂的化学反应解离具有高活性的羟基作用于细胞膜,其强氧化性破坏组成细菌的蛋白质,使之死亡。

灭菌彻底;残留性小

有腐蚀;易爆;致癌

臭氧灭菌

高压电场使电子管的内外电极发生强烈电子轰击,导致空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧不稳定,很快自行分解成氧气(O2)和单个氧原子(O);后者具有很强的活性,能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应,从而靠氧原子的弥漫性扩散达到杀菌之目的。

灭菌彻底;残留性小

费用较为昂贵

空气过滤

(恒温恒湿装置)

逐次使用不同孔径的滤膜将微生物过滤干净

除菌效果高;无毒

费用较为昂贵

5. 细胞房地面消毒方案

灭菌剂

作用原理

优点

缺点

Pharmacidal 喷壶

季铵盐作用方式是使脂质变性。分解细胞膜的双层磷脂和增加细胞通透性,导致酶失活,蛋白沉淀,与DNA和RNA产生反应,可有效防止真菌、细菌(和芽孢)和包膜病毒(包括HIV等RNA病毒)的污染和生长。

灭菌彻底;无毒无害;无刺激性;无腐蚀性;可生物降解

不能与肥皂或其他阴离子洗涤剂同用,也不能与碘或过氧化物(如过氧化氢、磺胺粉等)同用,否则会抵消其作用。

84消毒液

84消毒杀菌最主要的作用方式是通过它的水解作用形成次**,次**再进一步分解形成新生态氧[O],新生态氧的极强氧化性使菌体和病毒的蛋白质变性,从而使病原微生物致死。

灭菌彻底;残留性小;价格便宜

有腐蚀

新洁尔灭

(苯扎溴铵)

季铵盐类消毒剂属于阳离子表面活性剂,能吸附带阴离子的细菌并破坏细菌的细胞膜,增加细菌胞浆膜通透性, 使菌体胞浆物质外渗,阻碍其代谢而起到杀灭作用。

可杀灭常见细菌、真菌;刺激性低;无腐蚀

不能与肥皂或其他阴离子洗涤剂同用,也不能与碘或过氧化物(如过氧化氢、磺胺粉等)同用,否则会抵消其作用。

来苏尔

酚类可裂解并穿透细胞壁,使菌体蛋白凝集沉淀,快速杀灭细胞。

可杀灭常见细菌、真菌

刺激性强,易使橡胶制品变脆变硬

滴露

酚类可裂解并穿透细胞壁,使菌体蛋白凝集沉淀,快速杀灭细胞。

可杀灭常见细菌、真菌

刺激性强,易使橡胶制品变脆变硬


细胞污染杀除试剂
细菌克星-抗生素

货号

抗生素

作用对象

使用比例

储存条件

03-049-1B

卡那霉素溶液(10mg/ml)

细菌(如G+、G-、支原体)

稀释:1:100

-20ºC

03-035-1B

硫酸庆大霉素溶液(50 mg/ml)

细菌(如G+、G-、支原体)

稀释: 1:1000

AMB室温

03-031-1B

青链双抗(10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate)

细菌(如G+、G-)

稀释: 1:100

-20ºC

03-031-5B

青链双抗,10浓缩液(10X Conc., 100,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 100mg/ml, Streptomycin Sulfate)

细菌(如G+、G-)

稀释: 1:1000

-20ºC

03-032-1B

青链霉素,制霉菌素三抗(10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 1,250 units/ml Nystatin)

细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释: 1:100

-20ºC

03-033-1B

青链霉素,两性霉素B三抗(10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 25 ug/ml Amphotericin B)

细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释: 1:100

-20ºC

03-034-1B

青链霉素,新霉素三抗(10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 25mg/ml Neomycin Sulfate)

细菌(如G+、G-)

稀释: 1:100

-20ºC


真菌克星-抗生素

货号

抗生素

作用对象

使用比例

储存条件

03-029-1B

两性霉素(2500ug/ml)

真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释:1:1000 ~ 1: 10,000

-20ºC

03-030-1C

制霉菌素(10,000units/ml)

真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释:1:100 to 1:1000

-20ºC

03-032-1B

青链霉素,制霉菌素三抗(10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 1,250 units/ml Nystatin)

细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释: 1:100

-20ºC

03-033-1B

青链霉素,两性霉素B三抗(10,000 units/ml Penicillin G Sodium Salt, 10mg/ml Streptomycin Sulfate, 25 ug/ml Amphotericin B)

细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释: 1:100

-20ºC


支原体检测试剂

EZ-PCR支原体检测试剂盒(货号:20-700-20)。
支原体检测试剂盒的特异性:

引物与美国国家生物技术中心(NCBI)数据库进行比对,并检测16S,rRNA靶区同源性。96种支原体具有相关序列同源性。

支原体杀除试剂

BIOMYC-1(货号:03-036-1B)、BIOMYC-2(货号:03-037-1B)、BIOMYC-3(货号03-038-1B)

方案一:
BIOMYC-1(03-036-1B)和BIOMYC-2(03-037-1B)的使用方法:

1. 加 1ml的 BIOMYC-1 溶液至 100ml培养基中,保持受污染的细胞在混合液中培养 4 天。期间需加入含 BIOMYC-1 溶液的少许的新培养基;
2. 4天后,加1ml BIOMYC-2 溶液至 100ml 的新培养基中,并维持培养 3 天;

3. 以上是一个处理循环阶段,可继续2-3次如上处理循环。

4. 在处理过程中,细胞需要做支原体污染检测,以确认效果,从而适当减少实验过程。


方案二:
BIOMYC-3(03-038-1B)的使用方法:

1. 加1ml BIOMYC-3至100ml培养基中;

2. 持续培养14天,期间每2-3天更换一次含BIOMYC-3培养基;

3. 14天后,用不含BIOMYC-3的完全培养基继续培养细胞14天后再做支原体检测。


经济考虑,用户选择一种方案即可;最佳方案是,客户先用方案一处理一周期,再用方案二处理一周期。
友情提示:如果使用其中一种方案,不能根除支原体,说明该支原体可能在另一种方案的抑菌谱内;36,37,38三者联合可有效根除实验室95%以上的支原体污染。

黑胶虫杀除试剂

BIOMYC-1(03-036-1B)、BIOMYC-2(03-037-1B)、BIOMYC-3(03-038-1B)

三抗 03-033-1B主要成分:青、链、两性霉素。

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联系人: 市场部

电 话: 021-58785545,18918495545

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