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大鼠海马神经元细胞原代培养

作者:江阴齐氏生物科技有限公司 2014-05-28T09:52 (访问量:2168)

 

 

1、组织源:1周龄大鼠乳鼠

2、性别:雌雄不限

3、消毒方法:PBS清洗5

4、培养用液

基础培养基:DMEM(低糖)

添加因子:EGFDex;InsulinSeleniumGlutaminePenicillinStreptomycinFBS

5、消化用液

 成分:0.05%Collagenase-2(2%),0.1%Collagenase-1(2%)

时间:15min

温度:37

6、培养基本操作方法

1)小鼠表面喷70%酒精消毒,无菌解剖,取出海马组织;

2)无菌PBS清洗3次,用含双抗的无菌PBS清洗2次;

3)加入3ml酶消化液,用吸管吹打散组织,37℃消化15min

4)充分吹打细胞消化液,使细胞尽量脱落;

5)终止消化后,过200目筛网,1000rpm离心5min,弃上清液,加无菌PBS清洗并离心两次;

6)弃上清,往沉淀中加5ml完全培养基,重悬细胞后接种至25方瓶,37℃、5%CO2培养箱中培养观察。

 

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