人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)ELISA Kit

　ELISA试剂盒说明：
　　1．检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法
　　2．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
　　3．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
　　4．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
　　5．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
　　该Elisa试剂盒可检测样本：血液标本，组织液标本，尿液标本，粪便标本，脑脊液标本，胸腹水标本等（具体详细情况请咨询）
　　Elisa试剂盒操作步骤（具体操作以说明书为准）：
　　实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
　　1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
　　为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
　　2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
　　3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
　　4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，60分钟。
　　5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
　　6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
　　7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
　　8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。
　　注：
　　1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
　　2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
　　3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
　　4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
　　5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
　　自备物品
　　1.酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）
　　2.微量加液器及吸头，EP管
　　3.蒸馏水或去离子水，全新滤纸